Микробиоценоз влагалища женщин репродуктивного возраста - хорошо сбалансированная и устойчивая система. В норме в этом биотопе существуют микроорганизмы, способные выжить, сосуществовать и развиваться в конкретной физической среде, не вызывая заболевания макроорганизма.
Доминирующими агентами в микробиоценозе являются лактобактерии, продуктом жизнедеятельности которых является a-оксипропионовая молочная кислота, которая создаёт кислую реакцию влагалищного содержимого. Кроме кислой среды размножению патогенных микроорганизмов препятствуют образующаяся в результате жизнедеятельности лактобацилл перекись водорода, лизоцим и другие гликолитические ферменты.
Помимо лактобактерий, в урогенитальном тракте здоровой женщины репродуктивного возраста может обнаруживаться более ста видов различных бактериальных микроорганизмов, грибов, вирусов и простейших. Возникновение нарушений количественно-качественных взаимоотношений резидентных микроорганизмов - сапрофитных и условно-патогенных, населяющих мочеполовую систему в норме, приводит к возникновению дисбаланса. Развитие дисбаланса микробиоценоза может сопровождаться метаболическими, иммунными нарушениями и в ряде случаев клиническими проявлениями, степень выраженности которых варьируется от бессимптомного носительства до выраженной клинической манифестации.
В связи с вышеизложенным, такие нозологии как бактериальный вагиноз, урогенитальный кандидоз, заболевания, ассоциированные с микоплазмой, могут рассматриваться как частные случаи проявления дисбаланса микробиоценоза.
В настоящее время для установления диагноза используют традиционные методы клинической и лабораторной диагностики.
Этиологически значимые инфекционные агенты выявляются с помощью методов лабораторного исследования: микроскопии нативных и окрашенных метиленовым синим и по Граму препаратов, культурального исследования (5% кровяной агар, среда Эндо, жидкие и твёрдые среды Сабуро), ПЦР-диагностики.
Стандартные методы лабораторной диагностики урогенитальных инфекций имеют ряд объективных ограничений; качество выполнения исследований во многом определяется профессиональной квалификацией врача клинической лабораторной диагностики.
Микроскопия мазков, окрашенных по Граму, позволяет определить:
- количество и морфотинкториальные характеристики эпителиоцитов;
- количество лейкоцитов, наличие фагоцитоза;
- морфотипы микроорганизмов (10 морфотипов);
- относительную количественную характеристику общего числа микроорганизмов в исследуемом препарате.
Объективные ограничения светооптической микроскопии позволяют идентифицировать только 10 морфотипов: Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis, Bacteroides spp., Mobiluncus spp., Fusobacterium spp., Leptotrihia spp., Veillonella spp., Candida spp., грамположительные кокки, колиформные палочки, при этом многие виды этиологически значимых облигатных и условно-патогенных возбудителей выявить невозможно. Кроме того, микроскопия даёт приблизительную количественную оценку биоценоза, что особенно существенно в определении этиологического значения выявленных условно-патогенных микроорганизмов в развитии воспалительного процесса у конкретной пациентки. Существенными недостатками также являются субъективизм и зависимость результата исследования от профессиональной квалификации врача клинической лабораторной диагностики.
Классическая микробиология до настоящего времени является «золотым стандартом» лабораторной диагностики, поскольку позволяет выполнить количественную характеристику, идентифицировать микроорганизм до вида и определить чувствительность выделенного штамма к лекарственным препаратам. Однако и этот метод не лишён ряда недостатков. Условно-патогенные микроорганизмы, главным образом, представлены анаэробными и факультативно-анаэробными микроорганизмами, для культивирования которых требуются высококачественные селективные питательные среды, специализированные лаборатории, оснащённые необходимым лабораторным оборудованием для выращивания анаэробов, специальная подготовка медицинского персонала лаборатории и высокий профессионализм исследователей. Неизбежно снижение эффективности метода в связи с объективными и субъективными погрешностями. Недостатком метода являются также длительные сроки культивирования (в среднем 7 дней) и необходимость сохранения жизнеспособности микроорганизмов до момента поступления биоматериала в лабораторию. Кроме того, ряд этиологически значимых микроорганизмов относятся к труднокультивируемым, что не позволяет основывать верификацию диагноза на результатах культурального исследования.
Метод ПЦР с детекцией результата по окончании реакции без количественного определения инфекционного возбудителя позволяет быстро и эффективно выявить искомый патогенный или условно-патогенный микроорганизм, минуя стадию культивирования и выделения чистых культур. Однако выявление условно-патогенных микроорганизмов без учёта количества конкретного микроорганизма и количественно-качественного состава исследуемого биотопа в целом, не позволяет определить этиологическое значение выявленных условно-патогенных микроорганизмов в развитии инфекционно-воспалительного процесса у конкретного пациента.
Решением проблемы количественной оценки широкого спектра условно-патогенных микроорганизмов является новый способ диагностики (патент на изобретение № 2362808 от 13.02.2008 г. «Способ диагностики дисбаланса микробиоты различных биотопов человека и степени его выраженности»), основанный на использовании метода ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (RT-PCR). С его помощью стало возможным количественное обнаружение клинически значимых трудно- и некультивируемых условно-патогенных микроорганизмов - грамположительных бактерий (Atopobium vaginae), облигатно-анаэробных грамотрицательных бактерий (Prevotella, Veilonella spp, Porphyromonas spp, Fusobacterium spp, Eubacterium spp, Sneathia, Leptotrichia, Megasphaera, Dialister, Lachnobacterium).
В основу способа положена комплексная количественная оценка микробиоценоза урогенитального тракта путём сравнения содержания конкретных представителей нормо– и условно-патогенной биоты с общей бактериальной массой (ОБМ):
- сравнение количества лактобактерий с ОБМ даёт возможность оценить выраженность нарушений нормофлоры;
- соотношение количеств условных патогенов в ОБМ позволяет определять значимость тех или иных микроорганизмов в развитии дисбаланса и степень его выраженности;
- качество забора соскоба и адекватность результата исследования оценивается с помощью специального параметра – контроля взятия материала (КВМ). КВМ представляет собой количество геномной ДНК человека в биоматериале, источником которой являются эпителиальные клетки, попадающие в пробу при правильной технике взятия биоматериала;
- результаты количественных исследований методом RT-PCR не только дают возможность врачу определять объём необходимого вмешательства, но и позволяют выбрать точную направленность терапии;
- впервые можно оценить эффективность лечения и то, насколько удалось восстановить нормальный баланс биоценоза. В ходе исследования за короткий промежуток времени из одной биопробы выполняется количественная оценка КВМ, ОБМ (степень обсемененности), нормофлоры, безусловных патогенов и условно-патогенных микроорганизмов.
Выявляемые показатели
Комплексная оценка состояния микробиоценоза влагалища:
- КВМ, ОБМ, микоплазмы (Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp.), дрожжеподобные грибы (Candida spp.) – абсолютные значения;
- нормофлора (Lactobacillus spp.), облигатно-анаэробные микроорганизмы Gardnerella vaginalis/ Prevotella spp. – относительные количества генетически родственных групп микроорганизмов в ОБМ;
- идентификация патогенов (Chlamidia trachomatis, Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, CMV, HSV-1, HSV-2).
Под «spp.» подразумевается широкая группа микроорганизмов, значимая для диагностики дисбиоза, которая относится к данному роду, но может не соответствовать полностью роду в его систематическом понимании.
Материал для исследований. Для исследования женщин в репродуктивном возрасте используют соскобы эпителиальных клеток из влагалища (заднебоковые своды). Соскобы из уретры и цервикального канала могут быть исследованы по решению врача; в этих случаях трактовка результатов отличается.
Особенности взятия материала из влагалища: материал должен быть взят ДО проведения мануального исследования. Соскоб берут с верхнего бокового или верхнего заднего свода влагалища. У девочек взятие материала производят со слизистой оболочки преддверия влагалища, а в отдельных случаях - из заднего свода влагалища через гименальные кольца.
Особенности взятия материала из уретры: перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов; непосредственно перед взятием биоматериала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном (который можно смочить стерильным физиологическим раствором); при наличии гнойных выделений соскоб рекомендуется брать через 15-20 минут после мочеиспускания, при отсутствии выделений необходимо провести массаж уретры с помощью зонда для взятия биоматериала; в уретру у женщин зонд вводится на глубину 1-1,5 см, у детей материал для исследования берут только с наружного отверстия уретры.
Особенности взятия материала из цервикального канала: перед взятием материала необходимо УДАЛИТЬ ватным тампоном СЛИЗЬ и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором; зонд вводится в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см; при извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.
Правила взятия матриала. Открыть крышку пробирки. С помощью одноразового зонда сделать соскоб эпителиальных клеток. Перенести зонд с биоматериалом в пробирку с транспортной средой, зонд тщательно прополоскать в транспортной среде, затем извлечь и выбросить (при необходимости взятия биоматериала из нескольких биотопов, повторить процедуру, каждый раз забирая материал новым зондом в новую пробирку). Исключить попадание гноя или слизи в пробирку. Пробирку плотно закрыть крышкой и промаркировать.
Транспортировка и хранение исследуемого материала. ВНИМАНИЕ! Время от взятия материала до начала исследования не должно превышать 24 часов. Транспортировать и хранить образцы до начала исследования при +2...+8°С. В случае невозможности доставки материала в лабораторию в течение 24 часов допускается однократное замораживание материала на срок до 1 месяца.
Обратите внимание на учебное пособие для врачей!
Урогенитальные инфекции, обусловленные условно-патогенной биотой, у женщин репродуктивного возраста (клинико-лабораторная диагностика).
* КВМ - Контроль достаточности взятия материала
Cтоимость анализов указана без учета взятия биоматериала
