Скрининг возбудителей гельминтозов. Трематоды, кошачья двуустка, определение ДНК в кале

Синонимы: Анализ кала на трематод и кошачью двуустку методом ПЦР.

Screening helminthiasis pathogens. Trematoda spp., Opisthorchis felineus, PCR, Fecal.

Краткое описание исследования «Скрининг возбудителей гельминтозов. Трематоды, кошачья двуустка, определение ДНК в кале»

Трематоды (Trematoda spp.) – это класс паразитических плоских червей, также известных как сосальщики, относящийся к типу Плоские черви (Platyhelminthes). Это обширная группа (более 18 000 видов) облигатных эндопаразитов, характеризующихся сложным жизненным циклом со сменой хозяев, где промежуточным хозяином всегда являются моллюски, а окончательным – позвоночные животные, человек. Наиболее известные представители класса – печеночные сосальщики (кошачья двуустка, печеночная двуустка).

Описторхоз – это гельминтоз, вызываемый трематодой семейства Opistorhidae. Заражение человека O. felineus в основном происходит при употреблении в пищу сырой, недостаточно термически обработанной, малосоленой или вяленой речной рыбы семейства Карповых. Инкубационный период заболевания составляет около 2-3 недель.

Клинические проявления инвазии представлены:

• общим недомоганием;
• лихорадкой;
• интоксикационным синдромом, выраженным слабостью, ознобом, потливостью, снижением аппетита;
• болями в правом подреберье.

Описторхисы паразитируют у человека преимущественно:

• в желчных путях;
• в протоках поджелудочной железы.

Высокая частота бессимптомного варианта описторхоза ведет к риску недостаточной диагностики и развитию хронической формы инфекции.

Основной патологический процесс – хронический холангит и поражение протоков поджелудочной железы.

Патогенез описторхоза связан:

• с острыми воспалительными и аллергическими реакциями в ответ на выделяемые гельминтами продукты жизнедеятельности в острой фазе заболевания;
• с механическим повреждением гельминтами желчных, панкреатических протоков и желчного пузыря;
• с дегенеративно-гиперпластическими изменениями эпителия желчевыводящих путей при хроническом описторхозе;
• с возникновением условий, благоприятных для присоединения вторичной инфекции желчевыводящих путей и развития патологических состояний (дискинезии желчевыводящих путей, развития фиброза, склонности к камнеобразованию, временного или полного прекращения тока желчи).

Хронический описторхоз может продолжаться годами, проявления его полиморфны и могут варьировать от бессимптомного течения до тяжелого состояния с осложнениями в виде:

• гнойного холангита;
• панкреатита;
• камней в желчном пузыре;
• анемии;
• холангиокарциномы, цирроза печени (редко).

У людей, пораженных описторхами, чаще отмечается тяжелое течение бронхиальной астмы, сахарного диабета. В патогенезе хронической стадии описторхоза большую роль играют повторные заражения с обострением воспалительного процесса. Единичный случай воздействия и связанная с ним интенсивность инфекции несут меньшие риски развития тяжелых осложнений.

Лабораторные методы диагностики

Существующая диагностика гельминтозов, основанная на микроскопическом исследовании образцов кала человека на наличие яиц паразитов, имеет ряд недостатков, в частности, недостаточно высокую чувствительность, особенно на ранних стадиях развития паразита. Поэтому своевременная верификация диагноза требует разработки и внедрения новых молекулярно-биологических методов исследования, таких как ПЦР и MALDI–TOFMS.

Метод ПЦР:

• позволяет обнаружить ДНК паразитов за один цикл;
• обеспечивает высокую специфичность и чувствительность анализа, существенно сокращая время его проведения;
• позволят провести видовую дифференцировку возбудителей даже на ранних стадиях болезни.

Точность ПЦР-анализа при обнаружении гельминтов в сравнении с микроскопией варьирует от 91% до 100% и позволяет выявлять многих паразитов, за исключением нематод (ложноотрицательные результаты возможны до 20% случаев).

Использование высокочувствительного, быстрого и масштабируемого метода ПЦР может иметь важное значение:

• в диагностике геогельминтозов;
• в оценке интенсивности инфекции;
• в мониторинге эффективности лечения.

Аналитические показатели:

• определяемый фрагмент – специфичный участок ДНК;
• специфичность определения – 100%;
• чувствительность определения – 1,2х10^3 копий/мл исходного образца.

При обнаружении пациентом в фекалиях фрагментов плоских червей или особей круглых червей для их идентификации необходимо обращаться в региональный Центр эпидемиологии и гигиены или в инфекционную больницу.

С какой целью выполняют исследование

Молекулярно-генетические исследования (в т. ч. ПЦР-метод), выявляющие специфические фрагменты ДНК возбудителей в биоматериале, входят в стандартные схемы диагностики гельминтозов и позволяют быстро и эффективно верифицировать возбудителей этих заболеваний.

Что следует учесть при выполнении исследования

Нарушение правил подготовки к исследованию может повлиять на результаты тестов.

Литература

1. Лабораторная диагностика гельминтозов и протозоозов: Методические указания. - М.: ФБУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора. - 154 с.
2. Мусыргалина Ф. Ф. Медицинская паразитология: учеб. пособие //Уфа: Изд-во ФГБЩУ ВО БГМУ Минздрав России. – 2018. – С. 279.
3. Ющук Н. Д., Венгеров Ю. Я. Инфекционные болезни: национальное руководство. 3-е издание. – 2021.
4. Autier B., Gangneux J. P., Robert-Gangneux F. Evaluation of the Allplex™ GI-Helminth (I) Assay, the first marketed multiplex PCR for helminth diagnosis //Parasite. – 2021. – Т. 28.
5. Keller L. et al. Performance of the Kato-Katz method and real time polymerase chain reaction for the diagnosis of soil-transmitted helminthiasis in the framework of a randomised controlled trial: treatment efficacy and day-to-day variation //Parasites & vectors. – 2020. – Т. 13. – №. 1. – С. 1-12.
6. Rawla P., Sharma S. Enterobius vermicularis //StatPearls [Internet]. – StatPearls Publishing, 2021.
7. Wendt S. et al. The diagnosis and treatment of pinworm infection //Deutsches Ärzteblatt International. – 2019. – Т. 116. – №. 13. – С. 213.

Правила подготовки к исследованию

Кал должен быть свежесобранным.

Кал собрать в одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой (заранее взять в любом медицинском офисе под залог) в количестве не более 1/3 объема контейнера.

Материал доставить в медицинский офис в день сбора.

На контейнере указать фамилию, инициалы, дату рождения пациента, дату и время сбора материала разборчивым почерком.

В направительном бланке обязательно должен быть указан диагноз и дата начала заболевания, сведения о приёме антибиотиков. При взятии материала необходимо соблюдать стерильность.

Материал после окончания исследования в лаборатории не хранится.

С инструкцией по сбору материала можно ознакомиться здесь.

Показания для анализа «Скрининг возбудителей гельминтозов. Трематоды, кошачья двуустка, определение ДНК в кале»:

• подозрение на инвазию Trematoda spp./Opisthorchis felineus.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: тест качественный.

Референсные значения: не обнаружено.

Формат представления результата

Результат выдается в терминах «обнаружено» или «не обнаружено»:

• по Trematoda spp.;
• по Opisthorchis felineus.

Интерпретация результатов исследования «Скрининг возбудителей гельминтозов. Трематоды, кошачья двуустка, определение ДНК в кале»

Обнаружено

В анализируемом образце биологического материала найден фрагмент ДНК, специфичный для Trematoda spp., инфицирование Trematoda spp.

В анализируемом образце биологического материала найден фрагмент ДНК, специфичный для Opisthorchis felineus, инфицирование O. felineus.

Инфекция, вызванная соответствующим возбудителем.

Носительство возбудителя инфекции.

Не обнаружено

В анализируемом образце биологического материала не обнаружено фрагментов ДНК, специфичных для Trematoda spp., или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности метода.

В анализируемом образце биологического материала не обнаружено фрагментов ДНК, специфичных для Opisthorchis felineus. или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности метода.