ВПЧ скрининг (4+КВМ*), вагинальный соскоб

Лабораторная диагностика папилломавирусной инфекции - важнейший элемент скрининга и профилактики рака шейки матки (РШМ), что объясняется подтверждением этиологической роли вируса папилломы человека (ВПЧ) в развитии данного заболевания.

Преимуществами тестирования на ДНК ВПЧ являются простота взятия материала, автоматизация метода, унифицированность получаемых результатов, быстрота выполнения исследования, высокая специфичность у женщин старше 30 лет (у подростков и молодых женщин из-за высокого показателя спонтанной элиминации вируса клиническая интерпретация положительного результата должна проводиться с осторожностью).

Использовавшийся ранее метод классической ПЦР, позволяющий определить факт наличия/отсутствия в биоматериале пациента ВПЧ, недостаточно информативен. Определение типа вируса позволяет оценить риск развития неоплазии и дифференцировать персистенцию вируса от случая нового заражения при динамическом наблюдении. Высокая вирусная нагрузка рассматривается как один из факторов, снижающих спонтанную элиминацию вируса и увеличивающих риск развития неоплазии. Поэтому в последнее время широкое распространение получили количественные тесты по определению клинически значимых типов ВПЧ.

Digene-тест, основанный на методе «гибридного захвата», часто называют «золотым стандартом» диагностики папилломавирусной инфекции. Существует две модификации Digene-теста: для выявления папилломавирусов, ассоциированных с неоплазией шейки матки (типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и палилломатоза гортани (типы 6, 11, 42, 43, 44). Digene-тест позволяет выявить клинически значимое количество вируса папилломы, имеет высокую чувствительность, прогностическую ценность, однако не позволяет дифференцировать тип ВПЧ и достаточно дорог.

Указанных недостатков лишен метод ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (RT-PCR), позволяющем определить количество ДНК клинически значимых типов ВПЧ в образце. Результаты исследования представлены в геном-эквивалентах (ГЭ); количество ГЭ пропорционально количеству копий вируса в образце. Технологические особенности RT-PCR позволяют врачу-клиницисту подобрать оптимальный вариант диагностического лабораторного обследования каждого пациента и, при необходимости, динамического мониторинга ВПЧ.

Стандартизация диагностических тест-систем на основе RT-PCR даёт возможность пересчёта полученных результатов в единицы Digene, поэтому все клинические рекомендации по интерпретации результатов Digene-теста могут быть применены для результатов, полученных методом RT-PCR.

Необходимым условием корректного количественного анализа является чёткое соблюдение техники получения соскоба эпителиальных клеток, поэтому в состав пакетов по диагностике и мониторингу ВПЧ введен специальный параметр - контроль взятия материала (КВМ). КВМ представляет собой количество геномной ДНК человека в биоматериале, источником которой являются эпителиальные клетки, попадающие в пробу при правильной технике взятия биоматериала. КВМ позволяет количественно оценить адекватность взятия соскоба, а также произвести пересчёт результатов исследования на клетки человека.

Выявляемые показатели: Индивидуальные результаты количественного определения наиболее распространённых клинически значимых типов ВПЧ (4 типа HPV + КВМ):

• высокого онкогенного риска (HPV 16, HPV 18);
  
• низкого онкогенного риска (HPV 6, HPV 11).

Материал для исследований

• для женщин: соскоб эпителия с границы здоровой ткани цервикального канала и шейки матки;
• для мужчин: соскоб эпителия уретры.
  

Взятие образцов урогенитальных соскобов. Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови. Неадекватное взятие биоматериала контролируется специальным параметром – КВМ. Взятие урогенитальных соскобов проводится стерильным одноразовым зондом в пластиковые пробирки объёмом 1,5 мл с 500 мкл транспортной среды.

Порядок взятия материала в пробирку с транспортной средой. Открыть крышку пробирки. С помощью одноразового зонда произвести соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (цервикальный канал, уретра). Перенести зонд с биоматериалом в пробирку с транспортной средой, зонд тщательно прополаскать в транспортной среде, затем извлечь и выбросить (при необходимости взятия биоматериала из нескольких биотопов, повторить процедуру, каждый раз взятие материала должно осуществлятся новым зондом в новую пробирку). Пробирку плотно закрыть крышкой и промаркировать. В направительном бланке обязательно указать пол пациента (мужской или женский).

Особенности взятия материала из уретры:

• перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5 - 2 часов; 
• непосредственно перед взятием биоматериала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном (который можно смочить стерильным физиологическим раствором); 
  
• в уретру у мужчин зонд вводится на глубину 1,5-2 см.
  

Особенности взятия материала из цервикального канала:

• перед взятием материала необходимо УДАЛИТЬ ватным тампоном СЛИЗЬ и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором;
  
• зонд вводится в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см;
• при извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.
  

Транспортировка и хранение исследуемого материала. ВНИМАНИЕ! Время от взятия материала до начала исследования не должно превышать 24 часов. Транспортировать и хранить образцы до начала исследования при +2..+8°С. В случае невозможности доставки материала в лабораторию в течение 24 часов допускается однократное замораживание материала на срок до 1 месяца.

* КВМ - Контроль достаточности взятия материала

Литература

• Профилактика рака шейки матки: Руководство для врачей. - М.: МЕДпресс-информ, 2008.
  
• Полонская Н.Ю., Юрасова И.В., Сокольская Т.Ю. Преимущества и эффективность стандвртизации цитологических исследований в гинекологии // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. №11 с.47-50.
  
• Bekkers R., Meijer C., et al. Effects of HPV detection in population-based screening programmers for cervical cancer: a Dutch moment // Gynecol. Oncol. 2006; Mar: 100(3):451-4.
  
• Khan M., et al. The elevated 10-year risk of cervical precancer and cancer in women with human papillomavirus (HPV) type 16 or 18 and the possible utility of type specific HPV testing in clinical practice // J. nat. cancer inst. 2005; 97:1072-9.
  
• Snijders J., Meijer C. The value of viral load in HPV detection in screening // HPV today 2006; 8:8-9.

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Перед взятием материала из уретры пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5 - 2 часов.

Определение типа ВПЧ с количественной оценкой вирусной нагрузки рекомендуется:

• при выявлении любых изменений на шейке матки;
  
• для оценки эффективности вакцинации;
  
• для контроля проводимой терапии;
  
• в качестве скринингового обследования специальных групп женщин.
  

Стартовый возраст для начала скрининга:

• с 21 года или в течение 3 лет после начала половой жизни;
  
• с 18 лет при высокой степени сексуальной активности;
  
• с 30 лет для новых программ (основанных на выявлении ДНК ВПЧ) или с 25 лет для существующих программ (классическое цитологическое исследование).
  

Специальные группы, которым показан скрининг:

• женщины, имеющие в анамнезе рак шейки матки;
• женщины в возрасте 25-65 лет, которым никогда не проводилось цитологическое исследование или проводилось более 3 лет назад;
• женщины с кровотечением в репродуктивном периоде, кровотечениями после наступления менопаузы, посткоитальными кровотечениями.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Способ представления результата. Индивидуальный количественный результат по каждому выявляемому показателю.

Результат выдаётся в абсолютных единицах:
Lg (копий/образец). Для удобства трактовки результатов в ответе используется цветовая маркировка.

Контроль взятия материала

•  
  количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце более 10⁴ копий/образец: достаточное для анализа количество биоматериала;
•  
  количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце менее 10⁴ копий/ образец: НЕ достаточное для анализа количество биоматериала

Дифференцировка типов ВПЧ:

•  
  типы ВПЧ низкого онкогенного риска
  
•  
  типы ВПЧ высокого/среднего онкогенного риска
  

Интерпретация результата. При обнаружении в ходе диагностики или мониторинга клинически значимых типов ВПЧ дальнейшее ведение пациентов осуществлять в соответствие с методическими рекомендациями для врачей.