Исследуемый материал
Буккальный эпителий
Метод определения
ПЦР STR-фрагментов, с последующим их секвенированием и разделением методом капиллярного электрофореза в автоматизированном аппаратно-программном комплексе, идентифицирующим генные аллели у обследуемых лиц.
Молекулярно-генетическое исследование, направленное на определение биологического родства: отцовства или материнства, проводится для разрешения спорных случаев биологического происхождения детей.
Исследования выполняются с целью исключения или, напротив, установления родственных связей между предполагаемыми родителями (отцом или матерью) и ребёнком. Установление родства по характеристикам ДНК одно из направлений более масштабной области исследований, связанной с решением задач по идентификации личности молекулярно-биологическими методами. Генетическое установление родства основано на принципах передачи и хранения наследственной информации, записанной «четырёхбуквенной азбукой» в виде длинной «нити» текста из 3 миллиардов «букв», который известен как молекула ДНК.
Молекула ДНК, которая присутствует в ядре каждой клетки организма человека, компактно упакована и распределена в особых тельцах, именуемых хромосомами. Всего в каждой клетке находится 22 пары хромосом, которые называют аутосомами, а также 2 половые хромосомы. При этом одна из парных хромосом получена от отца, а другая от матери. Половые хромосомы также получены от родителей: от матери Х-хромосома, а от отца либо Y-хромосома (рождается мальчик), либо Х-хромосома (рождается девочка). Таким образом, у каждого человека в ядрах его клеток присутствует двойной комплект ДНК, и один, как уже указывалось, передан ему от матери, а другой - от отца. На полученных от родителей хромосомах, которые по-другому называют гомологичными, расположены гены, а точнее двойной комплект генов. По-другому, гены – это и есть те участки ДНК, на которых записаны свойства организма, в виде уже известной нам «четырёхбуквенной азбуки»: A, T, G и С. Так обозначают нуклеотиды-«буквы», из которых при всем разнообразии генов и составлена молекула ДНК.
Кроме генов, кодирующих свойства организма, в ДНК очень много «молчащих» участков, которые ничего не кодируют. В каждой гомологичной паре хромосом гены и «молчащие» участки ДНК расположены в одних и тех же местах, которые по-другому называют локусами. Однако последовательность нуклеотидов, расположенных в одних и тех локусах гомологичных хромосом могут различаться. Такие отличные друг от друга последовательности, расположенные в локусах материнской и отцовской хромосом называют аллелями. Если вдруг эти аллели оказались одинаковыми, то тот человек, который ими обладает, называется гомозиготой по данным локусам, а человек, у которого эти аллели отличаются, называется гетерозиготой. Как правило, локусы представлены двумя различными аллелями. Однако, в человеческой популяции одному и тому же локусу могут соответствовать десятки аллелей. Поэтому по таким локусам можно отследить всё разнообразие и непохожесть отдельных людей. Аллели, присутствующие у людей в большом разнообразии, называют высокополиморфными аллелями. В связи с этим, чем больше локусов с высополиморфными аллелями исследуется, тем точнее описывается «молекулярный портрет» человека, а если вернуться к проблеме идентификации личности, то она становится надёжнее и точнее.
При установлении отцовства или материнства основной принцип проведения исследования – это анализ максимально адекватного количества локусов с высокополиморфными аллелями. Основное правило, позволяющее утверждать, что ребёнок происходит от конкретных родителей – это то, что в генотипе ребёнка по любому из исследуемых локусов один из аллелей всегда совпадет с аллелем, полученным от отца, а другой с аллелем полученным от матери. Поэтому, высокополиморфные аллели – это основа разнообразия, которое чем более высоко, тем меньше вероятность случайного совпадения аллелей между предполагаемыми отцом (матерью) и ребёнком, у которого исследуется ДНК.
В связи с этим главное в методике генетического исследования биологического родства – это поиск и анализ совпадающих аллелей у предполагаемых родителей и ребенка. Если в образце ребёнка отсутствуют как минимум две совпадающие аллели с аллелями предполагаемого отца (матери) по одноименному хромосомному локусу и не сделано методических ошибок, то делается вывод об исключении отцовства (материнства). Для исключения случайного совпадения генетических данных у обследуемых лиц проводятся вероятностные расчёты для оценки достоверности полученного положительного заключения. Конечно, вероятность случайного совпадения генетических признаков по одному локусу сравнительно высока, однако использование более 10 локусов, позволяет достигать уровня достоверности 99,99% и даже выше.
Для установления отцовства (материнства) в нашей лаборатории используется анализ STR-локусов. Аббревиатура STR от английского Short Tandem Repeats переводится как короткие тандемные повторы. STR-локусы представляют собой участки ДНК длиной 2 - 5 нуклеотидов, которые могут повторяться. Количество таких повторов может отличаться в аллелях для однотипных локусов. Аллели STR-локусов как раз и относятся высокополиморфным аллелям. Установление родства по STR-локусам позволяет снизить вероятность случайных совпадений, так как таких локусов очень много и они равномерно распределены по всем хромосомам.
Процедура определения отцовства (материнства) начинается со сбора биоматериалов. В лаборатории таким материалом является цельная кровь обследуемых лиц. Из крови выделяется ДНК. Далее при помощи локус-специфичной ПЦР искусственно увеличивают количество копий аллелей по анализируемым локусам в миллионы раз. В последующем, наработанные копии аллелей разделяют и идентифицируют на автоматизированном программно-аппаратном комплексе. Сравнивая идентифицированные аллели ребёнка и предполагаемых родителей, проводится либо подтверждение отцовства (материнства), либо их исключение.
В лаборатории применяется система оценки аллелей по 15 локусам коммерческими тест-системами фирмы Applied Biosystems. Применение указанных тест-систем обусловлено не только их надёжностью, но и полному соответствию стандартам, принятым в Европе, США, Канаде и Латинской Америке. Для проведения исследования рекомендовано взятие образцов биоматериала не только у предполагаемого родителя (отца при определении отцовства, матери при определении материнства) и ребёнка, а также и у родителя (матери при определении отцовства, отца при определении материнства) родство с которым бесспорно. Это существенно увеличит достоверность результатов исследования, так как при исследовании локусов ДНК ребёнка и наличия совпадений с локусами ДНК единственного принимающего в обследовании родителя, нельзя на 100% утверждать что этот локус получен от принимающего участие в исследовании родителя, а не получен от другого родителя, который не принимает участия в исследовании. С другой стороны, участие уверенного в родстве с ребёнком родителя существенно снизит ваши расходы на проведение исследования.
Условия и правила для проведения исследования.
- Исследование проводится на предмет установления родства обследуемых лиц.
- Исследование проводится при полном добровольном согласии обследуемых лиц.
- Между обследуемыми лицами и Независимой лабораторией ИНВИТРО заключается договор на предмет установления родства.
- Заказчиком на проведение молекулярно–генетического исследования «Определение биологического родства» является лицо, которое оплачивает исследование.
- Результаты, получаемые пациентом, могут быть переданы им в судебные органы и могут быть рассмотрены как доказательство в судебных процессах только на усмотрение суда.
Независимая лаборатория ИНВИТРО предоставляет возможность определения отцовства и материнства анонимно.
- Заключение специального договора не требуется.
- Анонимное определение родства не требует обоюдного и документально подтверждающего согласия для обследуемых лиц.
- Предоставление документов, удостоверяющих личности обследуемых, не требуется.
- Присутствие законного представителя ребёнка, на иждивении которого он находится, не требуется.
- Результаты анонимного исследования не могут быть рассмотрены в суде и дают возможность пациенту удовлетворить только собственное любопытство, либо развеять некие сомнения.
Cтоимость анализов указана без учета взятия биоматериала
