Скрининг на возбудителей гельминтозов. Аскариды/широкий лентец, определение ДНК в кале

Синонимы: Анализ кала на аскаридоз/дифиллоботриоз методом ПЦР.

Screening of parasitic invasions. Ascaris spp./Diphyllobothrium spp., PCR, Fecal.

Краткое описание исследования «Скрининг на возбудителей гельминтозов. Аскариды/широкий лентец, определение ДНК в кале»

Аскаридоз – это гельминтоз, вызываемый круглыми червями аскаридами Ascaris lumbricoides. Человек, в кишечнике которого паразитируют аскариды, является единственным источником инфекции. Механизм передачи возбудителя аскаридоза фекально-оральный; пути передачи − пищевой, водный, бытовой. Способствует распространению аскаридоза употребление овощей, ягод и зелени с огородов, почва которых удобрена необезвреженными фекалиями.

Цикл размножения аскариды

Взрослые аскариды обитают в тонкой кишке, где самки после оплодотворения откладывают яйца. Попадая с фекалиями в окружающую среду, при благоприятных условиях яйца созревают. При проглатывании человеком зрелых яиц в верхнем отделе тонкой кишки из них выходят личинки, которые проникают через стенку кишки в нижнюю полую вену, далее в сосуды печени и легких, откуда переходят в альвеолы и бронхи. В легких они поднимаются по эпителию дыхательных путей в глотку и заглатываются в желудочно-кишечный тракт.

После повторного попадания в тонкую кишку они в течение 70-75 суток развиваются во взрослых паразитов, способных продуцировать яйца. Продолжительность жизни взрослой аскариды достигает года, после чего она погибает и с калом выводится наружу. Поэтому наличие аскарид на протяжении нескольких лет у одного человека объясняется только повторными заражениями.

В клиническом течении аскаридоза выделяют две фазы:

• раннюю (миграционную);
• позднюю (кишечную).

Первая фаза совпадает с периодом миграции личинок, тогда как вторая обусловлена паразитированием гельминтов в кишечнике и возможными осложнениями.

Основные клинические признаки аскаридоза:

• симптомы поражения легких (сухой кашель, одышка, боли в груди);
• субфебрильная температура;
• уртикарные высыпания;
• зуд;
• недомогание;
• слабость;
• головные боли;
• в клиническом анализе крови – эозинофилия до 20-30%, гиперлейкоцитоз (см. тесты №№ 5, 119).

В хронической фазе аскаридоза возникают:

• тошнота;
• дисфункция кишечника;
• боли в животе;
• нарушение сна.

Аскаридоз нередко провоцирует бронхиальную астму. Возможные осложнения аскаридоза:

• панкреатит;
• аппендицит;
• кишечная непроходимость.

Дифиллоботриоз – это гельминтоз, возбудителем которого является ленточный червь Diphyllobothrium latum (лентец широкий). Это один из самых крупных паразитов человека. Тело гельминта имеет вид сероватой ленты длиной от 50 см до 10 м, шириной 0,5-1,5 см. Широкий лентец паразитирует в кишечнике человека и плотоядных животных, а личиночная стадия – в рыбе.

Цикл размножения лентеца

Развитие лентеца протекает с участием промежуточных хозяев. Половозрелый гельминт паразитирует в тонком кишечнике. Его яйца с испражнениями хозяина выводятся во внешнюю среду и для дальнейшего развития должны попасть в воду. Там из яйца выходит подвижная личинка – корацидий, которую заглатывают первые промежуточные хозяева – планктонные рачки. В теле рачка в течение 20-25 суток развивается следующая стадия – процеркоид. Зараженных рачков поедает мелкая рыба, в теле которой личинки мигрируют в стенку кишечника, брюшину, мышцы, жировую ткань, печень, икру и превращаются в плероцеркоид. Следующим промежуточным хозяином паразита становятся хищные рыбы, которые заражаются, поедая инвазированных мелких рыб, и аккумулируют в теле большое количество плероцеркоидов. На этой стадии развития личинка становится инвазионной для окончательных хозяев – человека и наземных позвоночных. Заражение происходит при употреблении рыбы в сыром или недостаточно обработанном виде.

Попав в организм окончательного хозяина, плероцеркоид прикрепляется к стенке кишечника и за 2-3 недели превращается в половозрелого паразита. В кишечнике человека обычно обитает один, реже несколько лентецов. Срок жизни паразита исчисляется годами.

На человека паразит оказывает механическое и токсическое воздействие. Наблюдаются:

• общее ослабление организма;
• нарушение деятельности кишечного тракта;
• в тяжелых случаях развивается резко выраженная анемия, вызванная гиповитаминозом B12 и фолиевой кислоты.

Заболевание распространено среди населения, живущего у водоемов и употребляющего рыбу, особенно в сыром виде.

Лабораторные методы диагностики

Существующая диагностика гельминтозов, основанная на микроскопическом исследовании образцов кала человека на наличие яиц паразитов, имеет ряд недостатков, в частности, недостаточно высокую чувствительность, особенно на ранних стадиях развития паразита. Поэтому своевременная верификация диагноза требует разработки и внедрения новых молекулярно-биологических методов исследования, таких как ПЦР и MALDI–TOFMS.

Метод ПЦР:

• позволяет обнаружить ДНК паразитов за один цикл;
• обеспечивает высокую специфичность и чувствительность анализа, существенно сокращая время его проведения;
• позволят провести видовую дифференцировку возбудителей даже на ранних стадиях болезни.

Точность ПЦР-анализа при обнаружении гельминтов в сравнении с микроскопией варьирует от 91% до 100% и позволяет выявлять многих паразитов, за исключением нематод (ложноотрицательные результаты возможны до 20% случаев).

Использование высокочувствительного, быстрого и масштабируемого метода ПЦР может иметь важное значение:

• в диагностике геогельминтозов;
• в оценке интенсивности инфекции;
• в мониторинге эффективности лечения.

Аналитические показатели:

• определяемый фрагмент – специфичный участок ДНК;
• специфичность определения – 100%;
• чувствительность определения – 1,2х10^3 копий/мл исходного образца.

При обнаружении пациентом в фекалиях фрагментов плоских червей или особей круглых червей для их идентификации необходимо обращаться в региональный Центр эпидемиологии и гигиены или в инфекционную больницу.

С какой целью выполняют исследование

Молекулярно-генетические исследования (в т. ч. ПЦР-метод), выявляющие специфические фрагменты ДНК возбудителей в биоматериале, входят в стандартные схемы диагностики гельминтозов и позволяют быстро и эффективно верифицировать возбудителей этих заболеваний.

Что следует учесть при выполнении исследования

Нарушение правил подготовки к исследованию может повлиять на результаты тестов.

Литература

1. Клинические рекомендации. Аскаридоз. МЗ РФ. – 2025.
2. Лабораторная диагностика гельминтозов и протозоозов: Методические указания. - М.: ФБУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора. - 154 с.
3. Мусыргалина Ф. Ф. Медицинская паразитология: учеб. пособие //Уфа: Изд-во ФГБЩУ ВО БГМУ Минздрав России. – 2018. – С. 279.
4. Ющук Н. Д., Венгеров Ю. Я. Инфекционные болезни: национальное руководство. 3-е издание. – 2021. 
5. Autier B., Gangneux J. P., Robert-Gangneux F. Evaluation of the Allplex™ GI-Helminth (I) Assay, the first marketed multiplex PCR for helminth diagnosis //Parasite. – 2021. – Т. 28.
6. Keller L. et al. Performance of the Kato-Katz method and real time polymerase chain reaction for the diagnosis of soil-transmitted helminthiasis in the framework of a randomised controlled trial: treatment efficacy and day-to-day variation //Parasites & vectors. – 2020. – Т. 13. – №. 1. – С. 1-12.
7. Rawla P., Sharma S. Enterobius vermicularis //StatPearls [Internet]. – StatPearls Publishing, 2021.
8. Wendt S. et al. The diagnosis and treatment of pinworm infection //Deutsches Ärzteblatt International. – 2019. – Т. 116. – №. – С. 213.

Правила подготовки к исследованию

Кал должен быть свежесобранным.

Кал собирают в одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой (его получают в любом медицинском офисе под залог) в количестве не более 1/3 объема контейнера.

Материал доставляют в медицинский офис в день сбора.

На контейнере необходимо указать фамилию, инициалы, дату рождения пациента, дату и время сбора материала, запись должна быть сделана разборчивым почерком.

В направительном бланке обязательно должен быть указан диагноз и дата начала заболевания, сведения о приёме антибиотиков. При взятии материала необходимо соблюдать стерильность.

Материал после окончания исследования в лаборатории не хранится.

С инструкцией по сбору материала можно ознакомиться здесь.

Показания для анализа «Скрининг на возбудителей гельминтозов. Аскариды/широкий лентец, определение ДНК в кале»:

• подозрение на инвазию Ascaris spp./Diphyllobothrium spp.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: тест качественный.

Референсные значения: не обнаружено.

Формат представления результата

Результат выдается в терминах «обнаружено» или «не обнаружено»:

• по Ascaris spp.;
• по Diphyllobothrium spp.

Интерпретация результатов исследования «Скрининг на возбудителей гельминтозов. Аскариды/широкий лентец, определение ДНК в кале»

Обнаружено

В анализируемом образце биологического материала найден фрагмент ДНК, специфичный для Ascaris spp., инфицирование Ascaris spp.

В анализируемом образце биологического материала найден фрагмент ДНК, специфичный для Diphyllobothrium spp., инфицирование Diphyllobothrium spp.

Инфекция, вызванная соответствующим возбудителем.

Носительство возбудителя инфекции.

Не обнаружено

В анализируемом образце биологического материала не обнаружено фрагментов ДНК, специфичных для Ascaris spp., или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности метода.

В анализируемом образце биологического материала не обнаружено фрагментов ДНК, специфичных для Diphyllobothrium spp., или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности метода.