Антинуклеарный фактор (АНФ, HEp-2, титры. Антинуклеарные антитела методом непрямой иммунофлюоресценции на препаратах HEp-2-клеток; ANA IF, titers)

Описание

Исследуемый материал Сыворотка крови

Метод определения Непрямая иммунофлюоресценция на клетках перевиваемой клеточной линии НЕр-2 с определением основных типов свечения ядра.

При системной красной волчанке (СКВ) и других системных ревматических заболеваниях иммунный ответ направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т.е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. Такие эндогенные нуклеопротеиновые аутоантигены могут образовываться в ходе процесса апоптоза эпителиальных клеток (каскад генетически запрограммированных реакций, приводящих к удалению поврежденной или дефектной клетки) и напоминают чужеродные вирусные частицы. Ускорение процессов апоптоза под действием ультрафиолетового облучения, вирусных инфекций или лекарственных препаратов, одновременно с нарушенным или замедленным удалением продуктов апоптоза, запускает аутоиммунные ответы при СКВ. Нуклеопротеиновые антигены конденсируются в апоптотических тельцах, которые становятся мишенью для аутоантител.

В настоящее время описаны около 200 разновидностей антител к нуклеопротеинам и рибонуклеиновым кислотам, которые получили название антинуклеарные антитела. При аутоиммунных заболеваниях аутоантитела к ядерным антигенам не обладают прямым цитотоксическим действием на клетки человека, однако иммунные комплексы способны запускать иммунологическое воспаление, особенно в местах, где сосуды особенно тонки, в том числе в почках, коже, центральной нервной системе, синовиальной оболочке суставов, плевре.

Исследование антинуклеарного фактора (АНФ) представляет собой основной метод выявления антинуклеарных антител, позволяя выявлять аутоантитела к нуклеиновым кислотам (дсДНК, осДНК, РНК), рибонуклеопротеинам, а также большинству конформационных и нерастворимых антигенов. Антинуклеарные антитела в данном методе обнаруживают благодаря их связыванию с внутриклеточными антигенами перевиваемой линии клеток эпителия человека (HEp-2). Ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержит все антигены, характерные для человеческой клетки, что позволяет выявлять в одном тесте все основные антинуклеарные антитела. Метод непрямой иммунофлюоресценции на клеточной линии НЕр2 рекомендован в качестве золотого стандарта выявления антинуклеарных антител ведущими экспертами, включая европейские (EASI group 2010) и американские группы экспертов (ACR ANA Task force 2008). В силу многообразия антигенов антинуклеарных антител не все они могут быть очищены или синтезированы для использования в автоматизированных иммуноферментных тестах по выявлению антинуклеарных антител (таком как №125 Антинуклеарные антитела, скрининг ИФА). В свою очередь, легко растворимые компоненты ядра клетки могут утрачиваться из ядер клеток при фиксации препарата для проведения исследований АНФ методом непрямой иммунофлюоресценции (№1267). Поэтому использование ИФА-методов (антитела к экстрагируемым антигенам - ЭНА, антинуклеарные антитела, ИФА - АНА № 125) в комплексе с выявлением антинуклеарного фактора на клетках линии НЕр2 методом непрямой иммунофлюоресценции (АНФ №1267) позволяет избежать ложно-отрицательных результатов тестирования при системных ревматических заболеваниях.

Позитивность по АНФ на клеточной линии НЕр-2 отмечается при системной красной волчанке (СКВ), системных ревматических заболеваниях и многих аутоиммунных заболеваниях, что делает его универсальным тестом в обследовании больных с аутоиммунной патологией. Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка и кожные формы этого заболевания, склеродермия и ее разновидности, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена. Выявление АНФ имеет большое значение в диагностике ювенильного ревматоидного артрита и аутоиммунных заболеваний печени. Представители этого семейства аутоантител могут быть обнаружены при множестве других аутоиммунных (тиреоидит, диабет), инфекционных (вирусный гепатит), воспалительных и онкологических заболеваний. Встречаемость АНФ достигает 1-3% у клинически здоровых людей и несколько возрастает у лиц старше 65 лет. Лица с высокими титрами АНФ имеют повышенный риск развития аутоиммунных заболеваний.

Литература

Основная литература:

Лапин С.В.б Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Изд. «Человек», Санкт-Петербург, 2010», 272 с.
Насонов Е.Л., Александрова Е.Н. Современные стандарты лабораторной диагностики ревматических заболеваний. Клинические рекомендации / БХМ, М - 2006.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2011.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2007.
Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science – 2006.
Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimmune Diseases / Humana Press – 2008.
Инструкции к набору реагентов

Подготовка

Предпочтительно выдержать 4 часа после последнего приема пищи, обязательных требований нет.

Литература

Основная литература:

Лапин С.В.б Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Изд. «Человек», Санкт-Петербург, 2010», 272 с.
Насонов Е.Л., Александрова Е.Н. Современные стандарты лабораторной диагностики ревматических заболеваний. Клинические рекомендации / БХМ, М - 2006.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2011.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2007.
Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science – 2006.
Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimmune Diseases / Humana Press – 2008.
Инструкции к набору реагентов

Показания

Показания к назначению исследования: Тест показан для диагностики и дифференциальной диагностики следующих состояний:

• Системная красная волчанка; • Подострая кожная волчанка и другие разновидности кожной волчанки; • Смешанное заболевание соединительной ткани; • Синдром Шегрена и ассоциированные заболевания; • Диффузная и локализованная склеродермия, CREST синдром; • Воспалительные миопатии (полимиозит и дерматомиозит); • Ювенильный хронический артрит; • Аутоиммунный гепатит; • Первичный билиарный цирроз и склерозирующий холангит; • Полинейропатии и миелит.

Литература

Основная литература:

Лапин С.В.б Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Изд. «Человек», Санкт-Петербург, 2010», 272 с.
Насонов Е.Л., Александрова Е.Н. Современные стандарты лабораторной диагностики ревматических заболеваний. Клинические рекомендации / БХМ, М - 2006.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2011.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2007.
Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science – 2006.
Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimmune Diseases / Humana Press – 2008.
Инструкции к набору реагентов

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: титр. Интерпретация результатов.

Результатом определения АНФ является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки, при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Высокие титры разведения сыворотки отражают высокую аффинность и концентрацию аутоантител.

Выявление высоких тиров (1/640 и выше) указывает на высокую вероятность системного ревматического заболевания или аутоиммунного заболевания печени и требует внимательного клинического, лабораторного и инструментального обследования. Отсутствие повышенных титров антинуклеарного фактора значительно снижает вероятность системных аутоиммунных заболеваний.

В низких титрах (до 1/160) антинуклеарный фактор может отмечаться у 1-2% здоровых лиц и родственников больных с системными заболеваниями. Частота положительных титров в популяции несколько увеличивается с возрастом. Низкие титры антинуклеарных антител могут встречаться при многих аутоиммунных, инфекционных и онкологических заболеваниях. Отсутствие высоких титров антинуклеарных антител значительно снижает вероятность системного ревматического процесса и может использоваться скорее для исключения, чем подтверждения диагноза.

Повышение титров АНФ в динамике указывает на обострение системного заболевания, так при СКВ титр коррелирует с тяжестью процесса и снижается при эффективной терапии.

Кроме титра сыворотки, при положительном результате анализа описывается тип свечения ядра. Он обусловлен широким спектром антител, которые находят свои мишени внутри клетки. Описано более 20 типов свечения, однако в клинической практике используется 8 из них:

Референсные значения: < 1:160

Тип свечения	Мишени антител (примеры)	Заболевания
Гомогенный	Хроматин (дсДНК, гистоны)	СКВ, склеродермия
Гранулярный (мелко- ; крупно-)	Нуклеопротеины (RNP, Sm, SS-A, SS-B)	СКВ, смешанное заболевание соединительной ткани, дискоидная и подострая кожная красная волчанка, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, синдром Шегрена
Ядрышковый	Антигены ядрышка (фибриллярин)	Диффузная склеродермия
Центромерный	Центромера в хромосоме (CENT-B)	Склеродермия
Цитоплазматический	Антигены цитоплазмы (тРНК-синтетазы, рибосомы, органеллы)	Аутоиммунные заболевание печени, системная красная волчанка, полимиозит
Цитоплазматический (митохондриальный)	Антигены митохондрий (антигены пируват-декарбоксилазного комплекса)	Первичный билиарный цирроз
Точки в ядре	Нуклеопротеины	Аутоиммунные заболевание печени

Иногда могут быть описаны 2 типа свечения, при котором один в низких титрах маскирует другой. При выявлении положительного результата АНФ необходимо постараться установить антигенные мишени антинуклеарных антител, с помощью тестов выявления антител к двуспиральной ДНК (№126) и антител к нуклеосомам (№956), иммуноблота антинуклеарных антител (№827), иммуноблота антител при склеродермии (№826), иммуноблота антител при полимиозите (№ 939) и определения антител к кардиолипину (№№ 967- 969, 997).

Литература

Основная литература:

Лапин С.В.б Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Изд. «Человек», Санкт-Петербург, 2010», 272 с.
Насонов Е.Л., Александрова Е.Н. Современные стандарты лабораторной диагностики ревматических заболеваний. Клинические рекомендации / БХМ, М - 2006.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2011.
Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2007.
Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science – 2006.
Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimmune Diseases / Humana Press – 2008.
Инструкции к набору реагентов