Комплексное исследование функциональной активности фактора фон Виллебранда (vWF:Co/AG и vWF:CBA/AG) (von Willebrand factor functional activity assay)

Синонимы: Функциональная активность фактора фон Виллебранда.

Functional activity of von Willebrand factor.

Краткое описание исследования «Комплексное исследование функциональной активности фактора фон Виллебранда (vWF:Co/AG и vWF:CBA/AG)»

Фактор Виллебранда (vWF, ФВ) – ключевой компонент системы свертывания крови, функцией которого является участие в остановке мелких кровотечений за счет создания тромбоцитарного сгустка. В норме фактор Виллебранда образуется и хранится в эндотелиальных клетках внутренней выстилки сосуда в виде цитоплазматических включений (тельца Вайбеля-Паладе). При повреждении эндотелия мультимер белка высвобождается N-концом в просвет сосуда, оставаясь С-концом связанным с мембраной эндотелиальной клетки. Мультимеры фактора Виллебранда, связанные с эндотелием, запускают агрегацию тромбоцитов с последующим формированием тромбоцитарного тромба, что лежит в основе механизмов сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. При дефиците фактора Виллебранда, возникает патология гемостаза, проявляющаяся склонностью к кровотечениям.

Болезнь Виллебранда (БВ) – заболевание, связанное со снижением свертываемости крови, чаще всего наследственного характера. Обусловлено аберрациями в гене, кодирующем фактор фон Виллебранда. Выделяют качественные и количественные нарушения фактора Виллебранда, в соответствии с чем болезнь делят на типы и подтипы. При снижении концентрации фактора в крови диагностируют тип 1 заболевания, при полном отсутствии фактора vWF и значительном недостатке фактора VIII (FVIII) определяют тип 3. При функциональных нарушениях vWF имеет место тип 2.

При болезни Виллебранда 1-го и 2-го типов преобладает микроциркуляторный тип кровоточивости:

• экхимозы,
• кровотечения из слизистых (десневые, носовые, луночковые);
• выраженные меноррагии;
• акушерские кровотечения;
• кровотечения при проведении хирургических вмешательств и инвазивных диагностических процедур.

При типах БВ, характеризующихся выраженным снижением уровня FVIII (2A, 2N, 3), часто наблюдается смешанный (микроциркуляторно-гематомный) тип геморрагического синдрома, схожий с картиной типичной гемофилии.

Для диагностики подтипов заболевания исследуется фактор фон Виллебранда в плазме крови (антигена) и проводятся функциональные тесты, основанные на связывании фактора с ристоцетином или коллагеном. Определение индекса между активностью фактора и его содержанием позволяет провести дифференциальный диагноз между абсолютным снижением содержания (т. е. 1-м типом) и функциональным дефектом фактора (т. е. 2-м типом болезни Виллебранда).

Снижение индекса коллаген-связывающей активности отмечается при 2А и 2В типах болезни Виллебранда. Также для оценки функционального дефицита рекомендуется исследовать ристоцетин-связывающую активность фактора фон Виллебранда или провести комплексное исследование функциональной активности фактора. Уточнить причину дефекта гена фактора можно с помощью молекулярно-генетического диагностики с исследованием ряда экзонов VWF гена, а также оценке активности фактора FVIII системы коагуляции.

Различают количественные и качественные нарушения фактора Виллебранда (vWF), в соответствии с чем болезнь Виллебранда (БВ) делят на типы и подтипы. При снижении концентрации фактора Виллебранда диагностируют 1-й тип болезни, при функциональных дефектах фактора – 2й тип, при полном отсутствии фактора vWF определяют 3-й тип.

Тип 1 (частота 55-70%) проявляется количественным дефектом vWF (недостаточная продукция). Количество vWF снижено, но структура мультимера и функция каждой молекулы сохранены. Снижение количества vWF в плазме приводит к ослаблению его функциональной активности из-за отсутствия возможности к образованию достаточного количества связей с тромбоцитами и сосудистой стенкой. В итоге страдает сосудисто-тромбоцитарный гемостаз в сосудах микроциркуляции. В типе 1 выделяют отдельно подтип 1С, связанный с ускоренным выведением фактора из кровяного русла. Наследование болезни Виллебранда типа 1 доминантное с неполной пенетрантностью.

Тип 2 (частота 25%) проявляется качественными дефектами vWF. У большинства пациентов наблюдается непропорциональное снижение его функциональных свойств vWF:RCo (vWF:CB) или по отношению к количеству vWF, определяемому по уровню антигена (vWF:Ag). Может сопровождаться нормальным уровнем vWF в плазме. Одновременно отмечается снижение индексов vWF:Rсo/Ag и vWF:CBA/Ag, что указывает на выраженный дефект функции фактора.

Тип 2А. Характерен изолированный дефицит высокомолекулярных мультимеров vWF, связанный с их быстрой деградацией. Снижена адгезия тромбоцитов, зависимая от vWF. Качественный дефект vWF обусловлен повышенной чувствительностью vWF к металлопротеиназе ADAMTS-13, которая расщепляет высокомолекулярные мультимеры vWF, а также с дефектами сборки мультимеров vWF вследствие нарушения димеризации. Одновременно снижены индексы vWF:Rсo/Ag и vWF:CBA/Ag, что указывает на выраженный дефект функции фактора. Наследование аутосомно-доминантное или аутосомно-рецессивное.

Тип 2B. Повышенная аффинность vWF к рецепторам GPIb тромбоцитов обуславливает избыточное связывание крупных мультимеров vWF с тромбоцитами. В результате они быстрее подвергаются расщеплению под действием металлопротеиназы ADAMTS-13, количество крупных мультимеров в плазме уменьшается. Характеризуется выраженным снижением ристоцетин-индуцированной агрегации тромбоцитов, а также снижением коллаген-связывающей активности. У пациентов часто отмечается тромбоцитопения различной степени выраженности. Наследование аутосомно-доминантное.

Тип 2M связан с низкой ристоцетин-кофакторной активностью vWF при нормальном содержании и нормальной мультимерной структуре vWF. Данный подтип БВ включает различные варианты качественного дефекта vWF, в результате которых происходит нарушение связывания vWF с тромбоцитами или субэндотелием. Нарушение связывания с тромбоцитами снижает доступность мультимеров vWF для расщепления металлопротеиназой ADAMTS-13. В связи с этим распределение мультимеров vWF по молекулярной массе сохраняется без изменений после их секреции эндотелиальными клетками. У большинства больных типа 2М БВ наблюдается непропорционально низкая vWF:RCo активность относительно vWF:Ag, редко снижается vWF:CBA. Наследование аутосомно-доминантное или аутосомно-рецессивное.

Тип 2N обусловлен нарушением связывания vWF с FVIII (cнижение аффинности к FVII). У пациентов БВ типа 2N имеется дефект vWF в месте связывания с FVIII. В результате не образуется комплекс vWF–FVIII. У многих пациентов с данным вариантом БВ ранее диагностировали гемофилию А легкой или умеренной степени тяжести (FVIII:C в пределах 5-22%). У пациентов с БВ типа 2N при введении высокоочищенных концентратов FVIII наблюдается практически нормальное повышение активности FVIII, однако время его полужизни снижено. Наследование аутосомно-рецессивное.

Тип 3 (частота 1-3%). Наиболее тяжелая форма болезни. vWF практически полностью отсутствует. Характерно также отсутствие фактора FVIII.

С какой целью выполняют исследование

Комплексную оценку функциональной активности фактора фон Виллебранда используют в диагностике и определении типа болезни Виллебрандае.

Литература

1. Васильева М. Ю. Диагностика болезни Виллебранда 1-го типа //Тромбоз, гемостаз и реология. – 2020. – №. 2. – С. 33-39.
2. Клинические рекомендации по диагностике и лечению болезни Виллебранда. – 2018.
3. Костерина А. В. Вопросы диагностики и лечения болезни Виллебранда //Практическая медицина. – 2018. – Т. 16. – №. 7-2. – С. 51-54.
4. Папаян Л. П. Болезнь Виллебранда: этиология, патогенез, особенности лабораторной диагностики (лекция) //Вестник гематологии. – 2021. – Т. 17. – №. 4. – С. 32-42.
5. Favaloro E. J. Classification of von Willebrand disease in the context of modern contemporary von Willebrand factor testing methodologies //Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. – 2020. – Т. 4. – №. 6. – С. 952-957.
6. Favaloro E. J. et al. Comparative assessment of von Willebrand factor multimers vs activity for von Willebrand disease using modern contemporary methodologies //Haemophilia. – 2020. – Т. 26. – №. 3. – С. 503-512.
7. James P. D. et al. ASH ISTH NHF WFH 2021 guidelines on the diagnosis of von Willebrand disease //Blood advances. – 2021. – Т. 5. – №. 1. – С. 280-300.
8. Okubo N. et al. von Willebrand factor Ristocetin co-factor activity to von Willebrand factor antigen level ratio for diagnosis of acquired von Willebrand syndrome caused by aortic stenosis //Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. – 2024. – Т. 8. – №. 1. – С. 102284.
9. Smock K. J. Von Willebrand factor testing ratios in the diagnosis and subtyping of von Willebrand disease //International Journal of Laboratory Hematology. – 2023. – Т. 45. – С. 23-29.
10. Weyand A. C., Flood V. H. Von Willebrand disease: current status of diagnosis and management //Hematology/Oncology Clinics. – 2021. – Т. 35. – №. 6. – С. 1085-1101.

Правила подготовки к исследованию

Специальной подготовки перед взятием крови не требуется. Образцы плазмы на исследование активности фактора Виллебранда должны быть взяты до начала трансфузий плазмы либо плазмообмена. Взятие крови предпочтительно проводить натощак или через 4 часа от последнего приема пищи. После получения крови следует отделить плазму крови центрифугированием, а полученную плазму необходимо сразу заморозить при -20°С. Повторные циклы замораживания не допускаются.

В каких случаях проводят анализ «Комплексное исследование функциональной активности фактора фон Виллебранда (vWF:Co/AG и vWF:CBA/AG)»: 

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения:

Фактор Виллебранда (vWF:Ag) – U/ml.

Ристоцетиновая активность фактора Виллебранда (vWF:Rсo) – %.

Соотношение vWF:Rсo/Ag индекс – индекс.

Коллаген-связывающая активность фактора Виллебранда (vWF:CBA) – U/ml.

Соотношение vWF:CBA/Ag индекс – числовое значение.

Референсные значения:

Фактор Виллебранда (vWF:Ag) – 0,5-1,5 U/ml.

Ристоцетиновая активность фактора Виллебранда (vWF:Rсo) – 70-130 %.

Соотношение vWF:Rсo/Ag индекс – >0,7 индекс.

Коллаген-связывающая активность фактора Виллебранда (vWF:CBA) – 0,6-1,3 U/ml.

Соотношение vWF:CBA/Ag индекс – >0,7.

Формат представления результата

Количественный.

Трактовка результатов исследования «Комплексное исследование функциональной активности фактора фон Виллебранда (vWF:Co/AG и vWF:CBA/AG)»

Уровень антигена фактора Виллебранда (vWF:Ag) и индексы активности фактора (vWF:Rсo/Ag и vWF:CBA/Ag), входящие в референсный интервал, фактически исключают диагноз болезни Виллебранда (кроме редких форм).