Типирование ВПЧ (21+КВМ*), вагинальный соскоб

Лабораторная диагностика папилломавирусной инфекции - важнейший элемент скрининга и профилактики рака шейки матки (РШМ), что объясняется подтверждением этиологической роли вируса папилломы человека (ВПЧ) в развитии данного заболевания.

Преимуществами тестирования на ДНК ВПЧ являются простота взятия материала, автоматизация метода, унифицированность получаемых результатов, быстрота выполнения исследования, высокая специфичность у женщин старше 30 лет (у подростков и молодых женщин из-за высокого показателя спонтанной элиминации вируса клиническая интерпретация положительного результата должна проводиться с осторожностью).

Использовавшийся ранее метод классической ПЦР, позволяющий определить факт наличия/отсутствия в биоматериале пациента ВПЧ, недостаточно информативен. Определение типа вируса позволяет оценить риск развития неоплазии и дифференцировать персистенцию вируса от случая нового заражения при динамическом наблюдении. Высокая вирусная нагрузка рассматривается как один из факторов, снижающих спонтанную элиминацию вируса и увеличивающих риск развития неоплазии. Поэтому в последнее время широкое распространение получили количественные тесты по определению клинически значимых типов ВПЧ.

Digene-тест, основанный на методе «гибридного захвата», часто называют «золотым стандартом» диагностики папилломавирусной инфекции. Существует две модификации Digene-теста: для выявления папилломавирусов, ассоциированных с неоплазией шейки матки (типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и палилломатоза гортани (типы 6, 11, 42, 43, 44). Digene-тест позволяет выявить клинически значимое количество вируса папилломы, имеет высокую чувствительность, прогностическую ценность, однако не позволяет дифференцировать тип ВПЧ и достаточно дорог.

Указанных недостатков лишен метод ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (RT-PCR), позволяющем определить количество ДНК клинически значимых типов ВПЧ в образце. Результаты исследования представлены в геном-эквивалентах (ГЭ); количество ГЭ пропорционально количеству копий вируса в образце. Технологические особенности RT-PCR позволяют врачу-клиницисту подобрать оптимальный вариант диагностического лабораторного обследования каждого пациента и, при необходимости, динамического мониторинга ВПЧ. Стандартизация диагностических тест-систем на основе RT-PCR дает возможность пересчёта полученных результатов в единицы Digene, поэтому все клинические рекомендации по интерпретации результатов Digene-теста могут быть применены для результатов, полученных методом RT-PCR.

Необходимым условием корректного количественного анализа является чёткое соблюдение техники получения соскоба эпителиальных клеток, поэтому в состав пакетов по диагностике и мониторингу ВПЧ введен специальный параметр - контроль взятия материала (КВМ). КВМ представляет собой количество геномной ДНК человека в биоматериале, источником которой являются эпителиальные клетки, попадающие в пробу при правильной технике взятия биоматериала. КВМ позволяет количественно оценить адекватность взятия соскоба, а также произвести пересчёт результатов исследования на клетки человека.

Выявляемые показатели: индивидуальные результаты количественного определения клинически значимых типов ВПЧ (21 тип HPV + КВМ):

• высокого онкогенного риска (HPV 16, HPV 18, HPV 26, HPV 31, HPV 33, HPV 35, HPV 39, HPV 44 (55), HPV 45, HPV 51, HPV 52, HPV 53, HPV 56, HPV 58, HPV 59, HPV 66, HPV 68, HPV 73, HPV 82);
  
• низкого онкогенного риска (HPV 6, HPV 11).
  

Материал для исследований:

• для женщин: соскоб эпителия с границы здоровой ткани цервикального канала и шейки матки;
  
• для мужчин: соскоб эпителия уретры.
  

Взятие образцов урогенитальных соскобов. Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови. Неадекватное взятие биоматериала контролируется специальным параметром – КВМ. Взятие урогенитальных соскобов проводится стерильным одноразовым зондом в пластиковые пробирки объемом 1,5 мл с 500 мкл транспортной среды.

Порядок взятия материала в пробирку с транспортной средой. Открыть крышку пробирки. С помощью одноразового зонда произвести соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (цервикальный канал, уретра). Перенести зонд с биоматериалом в пробирку с транспортной средой, зонд тщательно прополаскать в транспортной среде, затем извлечь и выбросить (при необходимости взятия биоматериала из нескольких биотопов, повторить процедуру, каждый раз взятие материала должно осуществляться новым зондом в новую пробирку). Пробирку плотно закрыть крышкой и промаркировать. В направительном бланке обязательно указать пол пациента (мужской или женский).

Особенности взятия материала из уретры: перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов; непосредственно перед взятием биоматериала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном (который можно смочить стерильным физиологическим раствором); в уретру у мужчин зонд вводится на глубину 1,5-2 см.

Особенности взятия материала из цервикального канала: перед взятием материала необходимо УДАЛИТЬ ватным тампоном СЛИЗЬ и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором; зонд вводится в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см; при извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.

Транспортировка и хранение исследуемого материала. ВНИМАНИЕ! Время от взятия материала до начала исследования не должно превышать 24 часов. Транспортировать и хранить образцы до начала исследования при +2...+8°С. В случае невозможности доставки материала в лабораторию в течение 24 часов допускается однократное замораживание материала на срок до 1 месяца.

* КВМ - Контроль достаточности взятия материала

Литература

• Профилактика рака шейки матки: Руководство для врачей. - М.: МЕДпресс-информ, 2008.
  
• Полонская Н.Ю., Юрасова И.В., Сокольская Т.Ю. Преимущества и эффективность стандвртизации цитологических исследований в гинекологии // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. №11 с.47-50.
  
• Bekkers R., Meijer C., et al. Effects of HPV detection in population-based screening programmers for cervical cancer: a Dutch moment // Gynecol. Oncol. 2006; Mar: 100(3):451-4.
  
• Khan M., et al. The elevated 10-year risk of cervical precancer and cancer in women with human papillomavirus (HPV) type 16 or 18 and the possible utility of type specific HPV testing in clinical practice // J. nat. cancer inst. 2005; 97:1072-9.
  
• Snijders J., Meijer C. The value of viral load in HPV detection in screening // HPV today 2006; 8:8-9.

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Перед взятием материала из уретры пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.

Определение типа ВПЧ с количественной оценкой вирусной нагрузки рекомендуется:

• при выявлении любых изменений на шейке матки;
  
• для оценки эффективности вакцинации;
  
• для контроля проводимой терапии;
  
• в качестве скринингового обследования специальных групп женщин.
  

Стартовый возраст для начала скрининга:

• с 21 года или в течение 3 лет после начала половой жизни;
  
• с 18 лет при высокой степени сексуальной активности;
  
• с 30 лет для новых программ (основанных на выявлении ДНК ВПЧ) или с 25 лет для существующих программ (классическое цитологическое исследование).
  

Специальные группы, которым показан скрининг:

• женщины, имеющие в анамнезе рак шейки матки;
  
• женщины в возрасте 25-65 лет, которым никогда не проводилось цитологическое исследование или проводилось более 3 лет назад;
  
• женщины с кровотечением в репродуктивном периоде, кровотечениями после наступления менопаузы, посткоитальными кровотечениями.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Результат выдаётся в абсолютных единицах:
Lg (копий/образец). Для удобства трактовки результатов в ответе используется цветовая маркировка.

Контроль взятия материала

•  
  количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце более 10⁴ копий/образец: достаточное для анализа количество биоматериала;
•  
  количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце менее 10⁴ копий/ образец: НЕ достаточное для анализа количество биоматериала

Дифференцировка типов ВПЧ:

•  
  типы ВПЧ низкого онкогенного риска
  
•  
  типы ВПЧ высокого/среднего онкогенного риска
  

Интерпретация результата. При обнаружении в ходе диагностики или мониторинга клинически значимых типов ВПЧ дальнейшее ведение пациентов осуществлять в соответствие с методическими рекомендациями для врачей.